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重庆地区兔腹泻病原菌分离鉴定及检测方法的建立
作者: 许国洋 沈克飞 徐登峰 付利芝 张素辉 王孝友 杨柳
关键词: 兔腹泻 病原菌 分离鉴定 多重PCR 混合感染 检出率
摘要：对重庆地区兔细菌性腹泻病原菌进行分离鉴定并建立相应检测方法,为该病的检测及防控奠定基础.通过临床诊断与细菌分离培养,对引起兔腹泻的病原菌进行分离,利用细菌通用引物扩增分离菌16SrDNA基因序列,测序分析后构建系统进化发育树.同时,依据各病原菌特异性序列设计引物,建立PCR检测方法.结果表明,共分离到4种病原菌,分子生物学鉴定为:铜绿假单胞菌、产气荚膜梭菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌;依据铜绿假单胞菌外毒素eta基因、产气荚膜梭菌a毒素基因、金黄色葡萄球菌耐热核酸酶nuc基因和大肠杆菌外膜蛋白eae基因设计特异性引物,成功建立多重PCR检测方法,可从4种病原菌基因组混合物中扩增出大小分别为1 043、324、200和609 bp的目的条带,目的菌株最低检出浓度为103 cfu·mL-1.对重庆地区200份临床样本进行检测,发现4种病原菌普遍存在,其中,金黄色葡萄球菌单独感染检出率高达37.6％,与大肠杆菌的混合感染检出率达28.0％.
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