投稿须知
  1. 来稿必须写明作者真实姓名、工作单位全称、通讯地址、以及产生论文的项目来源或资助名称,并附第一作者简介:姓名,出生年,性别,最高学历,专业技术职务(职 ...

Ⅰ群禽腺病毒Hexon蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立与应用

作者: 张曼 韩飞 高睿 何亚鹏

关键词: Ⅰ群禽腺病毒 Hexon蛋白 原核表达 间接ELISA

摘要:旨在原核表达Ⅰ群禽腺病毒(Fowl adenovirus group Ⅰ,FAV Ⅰ)的Hexon蛋白,并以Hexon蛋白为包被抗原建立血清的间接ELISA检测方法.将FAVⅠ群Hexon基因克隆至原核表达载体pET-28a(+)中进行重组Hexon蛋白的诱导表达,对表达产物进行纯化,并进行Westernblot鉴定;纯化后的Hexon蛋白作为包被抗原,优化反应条件,建立血清的间接ELISA检测方法,并进行特异性、灵敏性和重复性试验,最后对临床样品进行检测.结果表明,原核表达获得大小约为37.4 ku的重组Hexon蛋白;Westernblot结果表明重组蛋白有良好的特异性和抗原反应性.FAV Ⅰ间接ELISA法优化反应条件为:抗原最佳包被质量浓度为5.0mg/L,封闭条件为37℃作用1h,血清以1∶200倍稀释作用1h,酶标二抗以1∶5 000倍稀释作用lh,TMB显色时间为10 min.在该优化条件下,OD450≥0.322为阳性,反之为阴性;特异性试验结果表明,对鸡新城疫、禽流感、沙门菌、金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌和大肠埃希菌阳性血清检测均为阴性;对阳性血清的敏感性可达1∶1 200,70份阳性血清的阳性率为97.1%;重复性试验结果表明,批内和批间OD450值的变异系数分别为1.2%~3.5%和5.1%~8.3%;用此方法对临床279份鸡血清样品检测的阳性率为51.3%.表明建立的EISA检测方法可用于FAV Ⅰ抗体水平的检测.


上一篇: 不同栽培模式下冬小麦灌浆过程中旗叶蔗糖代谢和籽粒淀粉积累特性
下一篇: G族黄曲霉毒素半抗原分子设计、抗原合成及抗体特性

Copyright © 陕西杨凌邰城路3号西北农林科技大学西林校区大铁10号信箱 版权所有沪、陕ICP备10207131号-23