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猪圆环病毒2型Cap基因原核表达载体的构建及表达
作者: 范兴琼 [1,2] ; 刘成倩 [2] ; 易建中 [2] ; 于宗幸 [1,2] ; 李红 [2] ; 张倩 [3] ; 余科 [3] ; 章岭 [3]
关键词: 猪圆环病毒2型 衣壳蛋白 原核表达 表达载体 纯化
摘要：根据GenBank上已发表的PCV2的衣壳蛋白（Cap蛋白）基因设计1对引物，利用PCR方法从已知PCV2病毒中扩增到l条DNA片段，将PCR产物克隆至pMDl8-T载体上获得稳定质粒，酶切及测序鉴定后，获得大小为578bp的Cap基因序列，将该基因插入表达载体pET-30a质粒中，获得重组质粒pET-30a-PCV2-Cap，并转化到大肠杆菌BL21（DE3）中。重组质粒pET-30a-PCV2-Cap经IPTG诱导后表达的重组蛋白分子量为28．0kD，经破碎后SDS-PAGE电泳分析表明该蛋白具有可溶性。Westernblot分析表明，该重组蛋白与PCV2阳性血清发生特异性反应，表明该重组蛋白具有良好的反应原性。